大肠杆菌(荧光法)测试片说明书
一、原理
本测试片含有干粉培养基、选择性抑制剂、荧光底物和冷水可溶性凝胶。培养基提供大肠杆菌生长所需营养;选择性抑制剂可有效抑制其它细菌的生长;当有大肠杆菌生长繁殖,荧光底物被分解,游离出荧光基团,365nm紫外灯下菌落呈蓝白色荧光。
二、包装规格
25片/包;20包/箱。
三、样品检验
1.样品制备
按常规方法制备样品稀释液(推荐稀释液为无菌生理盐水,不可使用磷酸盐缓冲液、含亚硫酸钠稀释液和其它含糖稀释液),根据样品中大肠杆菌数量推测选择2-3个连续稀释度备用。
2.接种
将测试片置于水平台面,揭开上层薄膜,吸1mL样品稀释液滴加于培养层,缓慢盖上上层薄膜,将匀液板有凹槽部分对准样品稀释液区域轻放于上层薄膜上,手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散。每个稀释度2个重复。
3.培养
接种后的测试片叠放(不多于15片)于自封口袋中(不封口),36℃±1℃培养。根据样品中大肠杆菌活性,8h-12h可对样品中大肠杆菌进行预判,16h-24h可进行准确计数。测试片最好放于平整处培养(可在培养箱中放一小块纸板),不可直接放于铁丝架上培养,容易使凝胶挤压变形。
4.计数
培养结束后取出测试片,暗室中365nm紫外灯下观察,有蓝白色荧光的为大肠杆菌(菌落为蓝白色圆点,周围有浅蓝白色荧光,可与其他荧光干扰物区分开),选择大肠杆菌数为10cfu/片-100cfu/片的测试片进行计数。废弃物需经121℃高压灭菌20分钟后处理。
四、测试片在大肠杆菌鉴定中的应用
本测试片可对常规检测中产气的LST、BGLB、EMB及其它大肠杆菌检测的中间环节进行挑菌鉴定。
1.水化测试片
将测试片置于水平台面,揭开上层薄膜,吸1mL稀释液滴加于培养层,缓慢盖上上层薄膜,将匀液板有凹槽部分对准稀释液区域轻放于上层薄膜上,手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散,凝固20分钟备用。
2.接种
将水化后测试片置于水平台面,揭开上层薄膜,接种针挑取待检菌点种于测试片上,盖上上层薄膜。
3.培养
接种后的测试片叠放(不多于15片)于自封口袋中(不封口),36℃±1℃培养8h。测试片最好放于平整处培养(可在培养箱中放一小块纸板),不可直接放于铁丝架上培养,容易使凝胶挤压变形。
4.结果判读
培养结束后取出测试片,暗室中365nm紫外灯下观察,有蓝白色荧光的为大肠杆菌阳性(菌落为蓝白色圆点,周围有浅蓝白色荧光,可与其他荧光干扰物区分开)。废弃物需经121℃高压灭菌20分钟后处理。
五、储存:
阴凉避光处保存,保质期1年;开封后放于自封口袋中于室温保存,并于1个月内用完。